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AP膠囊毒性和致突變性研究
衛生毒理學雜志 1999年第1期第13卷 健康保鍵
作者：陳冠敏 姜瑞釵 範福榮 陳韌雄 林健
單位：福建省衛生防疫站 (福州 350001)
AP膠囊是從菇料中分離獲得的一種菌制劑，該菌及發酵物含豐富的多糖、氨基酸、亞油酸等不飽和脂肪酸及維生素、微量元素，經動物試驗具有調節血脂等多種功能，正作為保健食品首次被開發利用。為此我們進行了整體和離體的毒性試驗。
材料與方法
1.樣品：AP菌粉與發酵物制成黃白色粉末。
2.試驗動物：昆明種小鼠體重22～25g，由福建省動物實驗中心提供，斷乳SD大鼠購自中科院上海實驗動物中心。
3.致突變性試驗﹝1，2﹞：(1) Ames試驗：選用標準的平板摻入法在加與不加S9的條件下進行，實驗設3個劑量：100，50，25μg/皿，另設陰性(蒸餾水)、陽性對照組，陽性物：2-AF，2、4、7-TNFone,NaN3,MMC。實驗結果以各劑量組平均回變菌落數與自發回變菌落數的比值(MR)來判斷。(2) 小鼠骨髓嗜多染紅細胞微核試驗：選用昆明種小鼠每組10只，雌雄各半，受試物設3個劑量：5，10，20mg/kg及陰性(蒸餾水)、陽性(CP100mg/kg)對照組，動物以0.02ml/g灌胃，按常規進行實驗。(3) 小鼠精子畸形試驗：選用昆明種小鼠每組5只，受試物設3個劑量：5，10，20mg/kg及陰性(蒸餾水)、陽性(CP40mg/kg)對照組，動物以0.02ml/g灌胃，按常規進行實驗。
4.大鼠90天毒性試驗：動物按體重隨機分成4組，每組20只，雌雄各半，受試物設3個劑量，3.75，7.5，15g/kg，拌入飼料喂養，另設陰性對照組(基礎飼料)。平均體重雌鼠為(69.25±4.36)g，雄鼠為(70.27±3.52)g，單籠喂養，自由進食飲水，實驗期間觀察動物一般狀態，每週稱體重，記錄飼料消耗量。喂養45，90天時，尾靜脈採血作血常規及生化指標：血清谷丙轉氨酸、尿素氮、總蛋白、白蛋白等測定，實驗結束時取肝、腎稱重，計算髒器系數，同時取出肝、腎、脾、胃作組織病理學檢查。
病理檢查幾種陽性判斷標準：
賁門與胃炎症細胞浸潤：指的是在粘膜層中出現炎細胞，其表現為有小堆聚集者方計為陽性。
肝脂變：肝細胞胞漿出現微小空泡直徑不到一半者均不計，只要切片中發現肝細胞胞漿空泡直經大于1/2胞核者定肝脂變為陽性(但數量並不重要，即不一定要多少肝細胞大空泡才列為“陽性”)。
脾小體數目增生：表現為(1)脾小體數目增多或(2)脾小體出現融合現象。
5.數據處理：用spss軟件進行t檢驗。
結果與討論
1.致突變性試驗：
(1) Ames試驗：在加S9和不加S9代謝活化系統的條件下，實驗各劑量組的MR值TA97：0.765～1.269，TA98：0.799～1.254，TA100：0.885～1.056，TA102：0.769～1.140，4個指示菌陽性組的MR值：4.003～52.174，受試物各組回變菌落數的MR＜2。提示基因突變檢測結果為陰性。
(2) 小鼠骨髓微核試驗：結果顯示陽性對照組微核率高達23.6‰～25.6‰，而各實驗組的微核率在0.04‰～1.80‰，與陰性對照組(0.61‰～1.0‰)相比差異無顯著性(P＞0.05)。
(3) 小鼠精子畸形試驗：結果顯示各劑量組的精子畸形率在1.00%～1.56%，與陰性對照組相近，而陽性對照組的精子畸形率高達6.82%，提示本試驗結果為陰性。
2.大鼠毒性試驗：
(1) 一般狀態觀察：實驗組喂養的大鼠毛質白，有光澤，一般狀態與陰性對照組比較無區別，也無死亡現象。
(2) 動物血常規檢驗：實驗組和對照組45，90天動物血紅蛋白、紅細胞、白細胞分類均在正常值範圍內，無明顯差異(P＞0.05)。
(3) 動物血清生化學檢驗：各組動物兩次採血所測的總蛋白、白蛋白、球蛋白、白/球比、血糖、膽固醇、肌肝等均在正常值範圍，且差異無顯著性(P＞0.05)。實驗組動物谷丙轉氨酶、谷草轉氨酶指標均接近或低于陰性對照組，結果見表1。
表1 大鼠血清ALT、AST檢測結果( ±s)(U/L)
| 劑量
g/kg |
ALT(1) |
AST(1) |
ALT(2) |
AST(2) |
| 雌 |
雄 |
雌 |
雄 |
雌 |
雄 |
雌 |
雄 |
| 0 |
47.60±5.23 |
68.30±9.79 |
198.60±37.13 |
221.80±29.15 |
63.60±8.76 |
84.84±8.29 |
198.10±38.29 |
222.3±30.10 |
| 3.75 |
45.10±5.58 |
60.10±6.84 |
181.10±31.85 |
207.70±32.74 |
68.10±15.77 |
70.10±6.44 |
194.10±25.32 |
218.9±22.79 |
| 7.50 |
42.80±2.57 |
56.40±4.35 |
175.40±21.93 |
210.50±19.40 |
64.80±5.67 |
75.80±5.57 |
184.50±26.61 |
220.3±33.72 |
| 15.0 |
43.20±4.18 |
67.90±5.95 |
173.00±33.82 |
199.90±23.33 |
68.90±11.52 |
77.10±8.72 |
187.60±41.29 |
204.7±31.30 |
表中數字代表出現陽性的動物數
(4) 內髒觀察及髒器系數:實驗組與對照組動物心、肝、腎、脾、胃等內髒肉眼觀察均正常。3個劑量組的髒器系數與陰性對照組相比均差異無顯著性(P＞0.05)。
(5) 組織病理學檢查：鏡檢可知實驗組與陰性對照組動物的肝、腎、胃、脾變經近于相仿，且均無重要病理變化。實驗組肝髒、腎髒指標還優于對照組(見表2)各組食道粘膜均無炎細胞浸潤，而大多數動物賁門部胃粘膜出現輕度慢性炎細胞浸潤。各組動物肝小葉結構完整，無纖維分離，未出現肝細胞濁腫、壞死等現象，各組少數動物雖出現輕度肝細胞脂變，但給藥組動物比陰性對照組出現的例數少，且肝竇細胞均無增生。各組動物腎小球毛細血管、腎間質雖呈輕度充血，但腎小球無纖維化現象，腎曲管上皮呈輕度濁腫，對照組與給藥低組動物均出現管型或鈣化性結石，而中、高組卻未出現(見表2)
表2 大鼠病理檢查結果
| 劑量g/kg |
肝細胞脂變 |
肝匯管區炎細胞浸潤 |
腎曲管上皮管型或結石 |
腎孟炎 |
脾小體增生 |
| 雌 |
雄 |
雌 |
雄 |
雌 |
雄 |
雌 |
雄 |
雌 |
雄 |
| 0 |
5 |
3 |
4 |
1 |
1 |
1 |
3 |
3 |
4 |
8 |
| 3.75 |
1 |
1 |
4 |
0 |
1 |
1 |
3 |
2 |
7 |
8 |
| 7.50 |
3 |
1 |
1 |
0 |
0 |
0 |
1 |
2 |
5 |
2 |
| 15.0 |
1 |
0 |
2 |
1 |
0 |
1 |
2 |
1 |
2 |
5 |
從整體和離體試驗結果可知：AP膠囊對體細胞及生殖細胞的遺傳物質無致突變作用、對基因無堿基對置換和移碼突變作用。毒性試驗結果表明：AP膠囊對動物無毒副作用，建議可作為新資源食品進行開發利用。
參考文獻
1.陳祖輝，等.環境致癌物生物系短期試驗.北京：人民衛生出版社，1975，21～25.
2.黃幸舒，等.環境化學物致突變致畸致癌試驗方法.杭州：浙江科學技術出版社，1985，13～46.216～235.264～270.
(修回日期 1998年5月)
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