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碘﹝131I﹞肝癌細胞膜單抗Hepama-1注射液對小鼠的急性毒性試驗
中國新藥雜志1999年第2期
來文 謝弘 王根鳳 王放 董曉琴 聶金榮 施張奎 陳雲祥 孫性善
摘要 目的：碘﹝131I﹞肝癌細胞膜單抗 hepama-1 注射液及其肝癌細胞膜單抗 Hepama-1溶液注射小鼠後的急性毒性試驗。方法：小鼠一次尾靜脈注入肝癌細胞膜單抗 hepama-1 溶液 0.4 mg單抗 /20g 或碘﹝131I﹞肝癌細胞膜單抗 hepama-1 注射液74MBq/20g，觀察小鼠的急性毒性反應。結果：試驗組鼠全部存活，一般狀態正常，體重增長，未見明顯急性毒副反應。結論：該藥品及其載體在指定的給藥方式條件下，在小鼠體內沒有引起明顯的急性毒副反應。
關鍵詞：碘﹝131I﹞人肝癌單克隆抗體注射液 人肝癌單克隆抗體溶液 急性毒性試驗
以單抗為載體之放射性碘標記物的動物急性毒性試驗研究資料對評估這一類藥物是否可以進入臨床研究無疑是非常重要的。迄今僅見到 kramer K 等﹝1﹞對患有神經外胚層起源的腫瘤的猴子所致的急性毒性試驗報道。本文報告了碘﹝131I﹞人肝癌單克隆抗體注射液及其載體注射小鼠後的急性毒性試驗，結果表明所指定的劑量及給藥方式尚無引發明顯急性毒副反應之虞。
材料與方法
1 材料
Balb/C小鼠，由上海市實驗動物中心提供,體重為19～20 g，雌雄各半，用于載體的急性毒性試驗。ICR小鼠，由浙江省實驗動物中心提供,體重為19～20 g，雌雄各半，用于制劑的急性毒性試驗。
肝癌細胞膜單抗 Hepama-1 溶液﹝2﹞，濃度為 1 mg/ml，中國科學院上海細胞生物學研究所提供。碘﹝131I﹞肝癌細胞膜單抗 hepama-1 注射液﹝2,3﹞，比放射性為184.63 MBq/mg，放射濃度為185 MBq/ml，放射免疫特異結合率為 45％，中國科學院上海細胞生物學研究所提供，臨用時,以滅菌生理鹽水稀釋成所需濃度備用。
2 方法
參照衛生部藥審辦頒布的“人用鼠源性單克隆抗體制備及質量控制要點”的要求，進行本試驗。
2.1 載體(單克隆抗體)的急性毒性試驗
據臨床推薦的治療方案(5 mg/次，一次經血管注射)，設定肝癌細胞膜單抗Hepama-1溶液的小鼠單次劑量為20 mg單抗/kg，相當于臨床人用劑量的200倍(50 kg/人，劑量按公斤體重計算)。設試驗組和對照組，每組小鼠24只，雌雄各半。試驗鼠一次尾靜脈注入0.4 mg單抗/20g，容量為0.4 ml；對照鼠給予等量生理鹽水。給藥後即刻，此後每隔1 h觀察記錄小鼠的一般狀態(包括對外來刺激的反應、活動行為、呼吸、痙攣、皮毛、排洩物等)、有無死亡及死亡過程。給藥後24 h各組處死雌雄小鼠各2個，剖檢觀察有無肉眼可見病變，如有病變應作病理切片檢查。其餘小鼠連續觀察14 d，每日觀察1次，隔日稱重1次。
2.2 制劑的急性毒性試驗
據臨床推薦的治療方案（925 MBq/次，比放射性 185 MBq/mg，一次經血管注射），設定碘﹝131I﹞肝癌細胞膜單抗Hepama-1注射液的小鼠單次劑量為3 700MBq/kg，相當于臨床人用劑量的 200倍。設試驗組和對照組，每組小鼠 24只，雌雄各半。試驗前小鼠飲0.1%KI 溶液代飲水 2 d，以封閉甲狀腺。試驗鼠一次尾靜脈注入74MBq/20 g，容量為 0.4 ml；對照鼠給予等量生理鹽水。給藥後即刻，此後每隔1 h觀察記錄小鼠的反應，觀察方法及指標同載體的急性毒性試驗。
結果
1 載體（單克隆抗體）的急性毒性試驗
小鼠一次尾靜脈注射相當于臨床推薦劑量200 倍的肝癌細胞膜單抗 Hepama-1 溶液後,一般狀態良好,與對照組小鼠無明顯差異。靜脈注射24 h後剖檢，肉眼未觀察到病變。無論攝食、體重，試驗組小鼠同對照組無任何明顯差異，試驗組鼠全部存活，一般狀態正常，體重增長，未見明顯毒副反應。
2 制劑的急性毒性試驗
小鼠一次尾靜脈注射相當于臨床推薦劑量 200 倍的碘﹝131I﹞肝癌細胞膜單抗Hepama-1注射液後，一般狀態良好，與對照組小鼠無明顯差異。靜脈注射24 h後剖檢，肉眼未觀察到病變。試驗組小鼠僅于給藥後2～5 d出現一過性攝食減少,體重下降，此後體重逐步恢復正常增長。在14 d的觀察期內，試驗組小鼠各時間段的體重雖明顯低于對照組鼠(P＜0.001，見表1)，但試驗組鼠全部存活，一般狀態正常，體重增長，未見明顯毒副反應。
表1 131I-抗人肝癌單克隆抗體對小鼠急性毒性試驗期間體重的影響(x±s)
| 性 別 |
組別(n) |
體重變化(g) |
| d1 |
d3 |
d5 |
d7 |
d9 |
d11 |
d13 |
d15 |
| 雌鼠 |
試驗組(10) |
19.54±0.39 |
17.98±0.61 |
18.58±0.76 |
20.0±0.91 |
21.45±1.14 |
22.14±1.01 |
23.05±0.83 |
23.45±0.86 |
| |
對照組(10) |
19.25±0.34 |
20.90±0.81 |
21.90±0.73 |
22.67±0.85 |
23.24±0.67 |
21.90±0.91 |
24.60±0.66 |
25.13±0.71 |
| |
t值 |
0.25 |
9.11 |
9.96 |
6.78 |
4.28 |
4.26 |
4.62 |
4.36 |
| 雄鼠 |
試驗組(10) |
19.41±0.37 |
17.87±0.47 |
18.53±0.47 |
19.58±1.29 |
21.11±2.39 |
22.90±2.17 |
23.25±2.32 |
24.60±2.14 |
| |
對照組(10) |
19.46±0.39 |
21.89±0.87 |
23.82±1.25 |
25.02±1.46 |
26.30±1.65 |
27.90±1.88 |
29.15±1.93 |
30.15±2.11 |
| |
t值 |
0.29 |
12.85 |
12.56 |
8.83 |
5.65 |
6.49 |
6.18 |
5.84 |
討論
本試驗包括載體及制劑兩部分，結果表明：無論是碘﹝131I﹞肝癌細胞膜單抗Hepama-1注射液，還是肝癌細胞膜單抗 hepama-1溶液，在指定的給藥方式條件下，在小鼠體內沒有引起明顯的急性毒副反應。Kramer k等﹝1﹞曾報道一種單克隆抗體的碘標記物對患有神經外胚層起源的腫瘤的猴子可引起體重減輕、發熱甚至輕癱的毒副反應，但他們所用的劑量高達19～48 Gy，反復注射7次。又據美國1997年FDA的有關規定，作為載體的單克隆抗體似不需要進行急性毒性試驗觀察，因我國尚未有新的文件規定，故仍依1990年衛生部文件進行。
作者單位：中國科學院上海細胞生物學研究所，上海 200031
聶金榮 施張奎 陳雲祥 孫性善 浙江省實驗動物與安全性重點實驗室
參考文獻
[1] Kramer K,Cheung NK,Humm j.Pharmacokinetics and acute toxicology of intraventricular 131 I-monoclonal antibody targeting disialoganglioside in non-human primates.J neurooncol,1997,35(2)︰101
[2] 謝弘，楊正洪，陳瑞銘，等.分泌人體肝癌單克隆抗體得兩個小鼠雜交瘤株及其抗體的專一性分析.實驗生物學報，1985，18(2)︰263
[3] Zhao-Chong,Zhao-You Tang，Hong Xie.Radioimmunotherapy for unresectable hepatocellular carcinoma using 131 I-Hepama-l mAb:preliminary results.Cancer Research Clinical Oncology,1993,119︰257
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