精神分裂症症狀與膽囊收縮素A受體基因之間的關系

　　中華神經科雜志2000年第33卷第3期

　　張向陽　週東豐　張培琰　尉軍

　　摘　要　目的　探討精神分裂症症狀與膽囊收縮素A（CCK-A）受體基因之間的關系。方法　自行設計CCK-A受體引物，採用聚合酶鏈反應（PCR）擴增技術，分析84例男性慢性精神分裂症患者（患者組）和70名男性健康者（對照組）CCK-A受體基因的多態性；同時評定患者發病時的臨床症狀。結果　（1）患者組與對照組間總的CCK-A受體等位基因、基因型差異均無顯著性；（2）有幻覺妄想綜合征的27例患者CCK-A受體等位基因頻數A₁為19個，A₂為35個，無幻覺妄想綜合征的57例患者A₁為23個，A₂為91個；前者基因型A_1/2及A_1/1為18例，A_2/2為9例，後者A_1/2及A_1/1為21例，A_2/2為36例，差異均有顯著性（P＜0.05）；（3）有一、二級家族遺傳史患者的CCK-A受體基因型A_1/2及A_1/1為11例，A_2/2為6例，無一、二級家族遺傳史患者A_1/2及A_1/1為22例，A_2/2為39例，差異有顯著性（χ²=4.468,υ=1,P＜0.05）。結論　CCK-A受體基因可能與精神分裂症的幻覺妄想綜合征相關聯。

　　關鍵詞：精神分裂症；幻覺；妄想；受體，縮膽囊素；多態性，限制性片段長度

　　由于精神分裂症的臨床症狀的多樣性，故有假說認為該病在病因上是異質性的^﹝1﹞。雖然精神分裂症的遺傳模式尚不清楚，但是遺傳因素在其發病機制中起了重要作用^﹝2﹞。目前，該病被認為是遺傳模式復雜的多因素疾病^﹝3﹞，同時，臨床症狀的多樣性可能與不同的基因所起的作用有關。多巴胺（DA）功能增高一直被認為是精神分裂症的生化基礎，但目前對編碼DA受體和DA代謝酶的基因研究都未能得出明確結論。研究發現神經肽，如膽囊收縮素（CCK）與DA位于同一神經元上，且具有調節DA能功能的作用^﹝4，5﹞。一些研究提示CCK可能在精神分裂症的發病機制中起到重要作用^﹝6，7﹞。本研究旨在探討CCK受體基因是否與精神分裂症的精神症狀之間存在一定的關系。

　　資料和方法

　　一、研究對象

　　1.患者組：為北京回龍觀醫院住院治療的慢性精神分裂症患者，符合國際疾病分類第10版的精神分裂症診斷標準，共84例，年齡30～67歲，平均（44±9）歲；均為男性中國漢族人，無血緣關系。

　　2.對照組：為70名男性健康獻血員。

　　二、 研究方法

　　1.DNA提取：每例受試者取靜脈血4 ml，採用乙二胺四乙酸抗凝，按常規提取DNA。

　　2.CCK-A受體基因型檢測：利用國際互聯網從人類基因庫中查到CCK-A基因序列（GenBank編號U23427）及其引物序列。在CCK-A基因第1 270位置上存在能被PstI酶切割的多態性。根據引物設計原則，我們設計的一對引物序列如下：上遊引物5′-CTGTTCACTTGAGGAGCTTTG-3′（1007～1 027），下遊引物5′-TTAGAAACTGACCTCCAACATGG-3′（1 728～1 750）。這樣包含多態性位點的聚合酶鏈反應(PCR)產物長度為744 bp，可被PstI切割為264 bp和480 bp兩個片段，其中未能被切開的記作A₁，被酶切開的記作A₂。 pCR體系為25 μl，內含200 ng基因組DNA、2.5 mmol/L dNTP、10 pmol/L引物、1×buffer緩衝液及0.2 u Taq酶，反應在PE 2400型擴增儀上進行，程序為94 ℃ 10 min，38個循環週期（94℃ 30 s，58 ℃ 30 s，67 ℃ 45 s），72 ℃ 10 min。取PCR產物，加1 U pstI內切酶，于37 ℃酶切4 h。2%瓊脂糖電泳分離酶切產物，EB染色，應用數碼照相機在紫外線燈下照相，並存入計算機；打印出結果後，根據電泳帶型確定CCK-A基因型。

　　3.臨床資料評定：用自我編制的量表，根據患者的病史資料，由主管醫師記錄患者的一般情況、首次發作時的詳細症狀和診斷、目前診斷、家族史等30餘項條目。臨床症狀採用有或無的方式評定。排除資料不全或難以判斷的病例。

　　4.數據處理：應用優化擬合χ²檢驗計算基因型分布是否符合Hardy-Weinberg(H-W)平衡；各組等位基因頻率、基因型頻率分布差異比較應用SPSS for Window進行計算，相對危險度（RR）應用woolf方法計算。

　　結果

　　1.優化擬合檢驗：對患者組和對照組進行優化擬合檢驗的χ²=1.99，χ²=2.85，P均＞0.05，表明觀察值與期望值之間的差異無顯著性，患者組和對照組基因型分布符合H-W平衡定律。

　　2.CCK-A受體等位基因及基因型的比較：患者組等位基因A₁為42個、A₂為126個，對照組A₁為31個、A₂為109個；患者組基因型A_1/1為39例、A_2/2為45例，對照組A_1/1為30例、A_2/2為40例，兩組差異均無顯著性（P均＞0.05）。

　　3.有無幻覺妄想綜合征患者的CCK-A多態性等位基因頻數比較：有幻覺妄想綜合征的27例患者中A₁為19個、A₂為35個，無幻覺妄想綜合征的57例患者中A₁為23個，A₂為91個，經χ²檢驗，差異有顯著性（χ²=4.40,υ=1,P＜0.05）,RR=2.15，可歸因子為0.19。

　　4.有無幻覺妄想綜合征患者的CCK-A多態性基因型比較：有幻覺妄想綜合征患者A_1/2及A_1/1為18例，A_2/2為9例，無幻覺妄想綜合征患者A_1/2及A_1/1為21例，A_2/2為36例。經χ²檢驗，差異有顯著性（χ²=6.55,υ=2, p＜0.05）,RR=3.44，可歸因子為0.477。

　　5.有無一、二級家族遺傳史患者的CCK-A基因型比較：在78例(有6例未能收集到資料)中，有家族遺傳史患者A_1/2及A_1/1為11例，A_2/2為6例，無家族遺傳史患者A_1/2及A_1/1為22例，A_2/2為39例。經χ²檢驗，差異有顯著性（χ²=4.47,υ=1,P＜0.05）,RR=3.25，可歸因子為0.45。

　　6.有無幻覺妄想綜合征患者兩組的CCK-A受體等位基因、基因型與對照組比較：無幻覺妄想綜合征亞組與對照組之間CCK-A受體等位基因、基因型的差異無顯著性（P均＞0.05）；而有幻覺妄想綜合征亞組CCK-A受體多態性等位基因頻率與對照組比較差異存在顯著性(χ²=4.06,P＜0.05)，RR=2.27，可歸因子為0.33。

　　討論

　　已有研究發現，CCK-A受體主要分布在胃腸道系統，也選擇性地分布在中樞神經系統^﹝8﹞。在中樞神經系統，伏狀核處的CCK-A受體調節DA釋放增加，這可能與一些與DA功能異常有關的神經、精神疾病，如精神分裂症有關^﹝9﹞。幻覺妄想綜合征是精神分裂症典型的陽性症狀。一般認為，陽性症狀可能與DA能功能亢進有關。本研究發現，CCK-A受體基因的PstI多態性與精神分裂症幻覺妄想綜合征相關，提示CCK-A受體基因可能在精神分裂症的幻覺妄想綜合征發展過程中起作用。我們在參考GenBank數據庫提供的CCK-A受體基因序列時發現，PstI多態性位點處在內含子1與外顯子2的交接處，此處基因的變異，可能對CCK-A受體基因轉錄mRNA過程中的切割內含子步驟產生影響，進而使受體結合配體、或其他生物學功能發生障礙。當然，目前尚不能排除這種可能性：一個致病基因或與發病相關的基因與CCK-A受體基因緊密連鎖。我們準備對基因測序、蛋白表達等以進一步探討。

　　我們也發現，有無一、二級家族遺傳史患者在CCK-A基因型的差異存在顯著性，即有家族史的患者出現CCK-A受體基因變異的可能性增加，提示遺傳因素對精神分裂症一些可能的致病基因的產生起到一定的作用，進而表現出疾病的家族聚集性。

　　本研究結果提示，精神分裂症總的CCK-A受體基因分布與對照組的差異無顯著性，但當以症狀為單位進行分組後，顯示此基因與陽性症狀相關，提示對精神分裂症開展分子遺傳學研究時，應以臨床症狀進行分類，而不應籠統地以疾病進行分類。

　　在臨床上，一些研究用CCK及其激動劑、拮抗劑治療精神分裂症，但結果相互矛盾^﹝9﹞。有學者提出，伏狀核處CCK-A受體促進DA釋放，而分布全腦的CCK-B受體抑制DA的更新率^﹝8﹞。CCK-A受體與CCK-B受體的功能平衡，對維持大腦的功能狀態可能起到很重要的作用；而它們之間的失衡，可能導致精神症狀。因此，CCK及其激動劑、拮抗劑的作用可能依賴于這兩種受體間的功能平衡。另一方面，有研究提示，CCK受體基因的變異可能影響受體功能，也可能決定個體對精神分裂症的易感性。對這些受體進行基因分型，對探索精神分裂症的發病機制及新的治療方法可能會提供新線索。

　　作者單位：週東豐（100083北京醫科大學精神衛生研究所)

　　張向陽（100083北京醫科大學精神衛生研究所　現在北京回龍觀醫院心理科)

　　張培琰（北京回龍觀醫院)

　　尉軍（英國精神分裂症聯合會生物精神病學研究所）

　　參考文獻

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