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霉酚酸酯與雷帕霉素合用預防及逆轉大鼠心髒移植排斥反應
中華器官移植雜志2000年第21卷第2期
彭鈞錚 張元芳 丁強 齊世傑 徐大生 陳惠方
摘 要 目的 評價霉酚酸酯(MMF)與雷帕霉素(RAPA)合用預防及逆轉大鼠心髒移植後排斥反應的作用。方法 將實驗動物隨機分為4組：(1)對照組；(2)單用MMF組；(3)單用RAPA組；(4)MMF與RAPA合用組。結果 單用MMF和單用RAPA組與對照組比較均顯著延長移植心髒存活時間，MMF與RAPA合用組與對照組比較非常顯著地延長移植心髒存活時間，並且心髒存活時間明顯長于同劑量兩藥的單用組。結論 MMF與RAPA具有很強的協同效應，能夠預防與逆轉大鼠心髒移植排斥反應。
關鍵詞：心髒移植 霉酚酸 雷帕霉素
霉酚酸酯與雷帕霉素是兩種新型的免疫抑制劑，為探討兩藥合用的免疫抑制作用，我們對兩藥亞治療劑量合用的免疫抑制效應進行了初步研究，報道如下。
材料與方法
一、實驗動物：9～11週的雄性BrownNorway大鼠、Lew大鼠分別作為供、受體，均購于美國HarlanSprague公司。
二、實驗設計：依藥物應用的目的將實驗分為兩大類：預防心髒移植後排斥反應類和逆轉心髒移植後排斥反應類。每類均分為4組，第1組為對照組，不用任何免疫抑制劑；第2組為MMF不同劑量單用組；第3組為RAPA不同劑量單用組；第4組為MMF與RAPA不同劑量合用組。每組動物數均為6只，預防排斥反應類4組均于術後第1d至30d給藥，逆轉排斥反應類4組均于術後第4d至34d給藥。
三、免疫抑制劑的應用：RAPA由美國Wyeth-Ayerst研究所資助，稀釋于質量濃度為70%的聚乙烯乙二醇400.N.N-二甲縮醛以及10%的吐溫80的容量中，MMF由加拿大RocheBioscience公司惠贈，將粉劑的MMF懸浮于含有Carbopal凝膠的甲羧基纖維素中配置成20g/L，兩藥術後均連續應用30d，灌胃給藥，術後觀察60d。
四、心髒移植手術：(1)供心摘取：BrownNorway大鼠用戊巴比妥40mg/kg腹腔注入麻醉，需要時輔助應用水合氯醛160mg/kg，胸部“V”形切口，顯露心髒置于4℃冰水中，在結扎下腔靜脈前用肝素化4℃生理鹽水先灌注下腔靜脈，5-0絲線分別結扎上下腔靜脈及肺靜脈，遊離升主動脈及肺動脈幹切斷，供心用4℃林格氏液灌注後保存不超過30min。(2)異位心髒移植術：受體LEW大鼠正中切開腹腔，顯露腹主動脈及下腔靜脈，將供心升主動脈與受體腹主動脈、供心肺動脈與受體下腔靜脈先後行端側吻合，關腹。(3)心髒移植後每天腹部捫診心髒搏動，心跳停止前1d作為移植心最後存活時間，移植心停跳時已發生不可逆的排斥反應，並經剖腹後心髒標本病理證實。大鼠心髒移植術後3d內停止搏動，作為手術失敗(＜3%)標準，不計入統計分析。
五、統計分析：大鼠心髒存活期用均數±標準差表示，組間比較存活率應用Gehan's存活率檢驗，兩藥間相互作用判斷應用聯合指數(CI)，依據Chou's理論：CI值＜0.9提示兩藥具有協同效應，CI0.9～1.1提示累加效應，CI＞1.1提示兩藥拮抗，應用Calcusyn生物軟件處理得CI值。
結 果
一、MMF與RAPA合用預防大鼠心髒移植排斥反應(見表1)。
表1 各組預防大鼠心髒移植後排斥反應的作用比較
| 組別 |
免疫抑制劑劑量
(mg?kg-1.d-1) |
移植心存活時間
(d) |
CI值 |
| 第1組 |
0 |
6.5±0.6 |
- |
| 第2組 |
10 |
12.5±2.6* |
- |
| |
20 |
19.3±9.0* |
- |
| 第3組 |
0.2 |
19.2±2.0* |
- |
| |
0.4 |
30.0±7.3* |
- |
| 第4組 |
10+0.2 |
52.7±5.7* |
0.189 |
| |
20+0.2 |
57.7±5.7* |
0.084 |
注：*與對照組比較，P＜0.01
二、MMF與RAPA合用逆轉大鼠心髒移植排斥反應(見表2)
表2 各組逆轉大鼠心髒移植後急性排斥
反應的作用比較
| 組別 |
免疫抑制劑劑量
(mg?kg-1.d-1) |
移植心存活時間
(d) |
CI值 |
| 第1組 |
0 |
6.5±0.6 |
- |
| 第2組 |
10 |
10.8±0.8* |
- |
| |
20 |
24.3±6.2* |
- |
| 第3組 |
0.2 |
11.7±2.4* |
- |
| |
0.4 |
27.2±8.5* |
- |
| 第4組 |
10+0.2 |
35.5±16.0* |
0.794 |
| |
20+0.2 |
57.2±4.7* |
0.310 |
注：*與對照組比較，P＜0.01
討 論
動物實驗研究及初步的臨床應用表明MMF具有良好的抗排斥反應效果，但同時有誘發白細胞減少，上消化道功能障礙以及巨細胞病毒感染的副作用﹝1﹞。RAPA具有延長不同種類動物移植器官存活的作用，但在大動物特別是犬的器官移植中發現：有發熱、厭食、嘔吐、嚴重體重減輕，胃潰瘍，血管炎等毒性反應﹝2﹞。本研究選擇亞治療劑量的MMF與RAPA合用以期避免兩者的不良反應，同時獲得良好的免疫抑制效果。結果表明：兩藥合用在預防及逆轉大鼠心髒移植後急性排斥反應中具有良好的協同作用，兩藥合用預防及逆轉移植心髒急性排斥反應的效果優于兩藥同劑量單用組，亞治療劑量MMF與RAPA合用，在預防移植心髒急性排斥反應中與大劑量RAPA具有相同效果，MMF、RAPA兩者不同的作用機制可解釋其協同效應，細胞激活依賴于嘌呤的重新合成，MMF通過抑制次黃嘌呤核苷--磷酸脫氫酶從而阻斷嘌呤的再合成，達到選擇性阻斷T.B細胞增殖，抑制抗體形成及毒性T細胞的產生，但其不影響細胞因子的產生﹝3﹞。RAPA主要抑制細胞週期中晚期細胞的增殖，破壞T細胞對增殖促進作用的淋巴因子反應，也具有在G0-G1期調節一些細胞因子穩定性的作用，MMF與RAPA合用在預防及逆轉大鼠心髒移植急性排斥反應中的良好協同作用為臨床應用展現良好的前景。
作者單位：彭鈞錚（200040 上海醫科大學附屬華山醫院泌尿科）
張元芳（200040 上海醫科大學附屬華山醫院泌尿科）
丁強（200040 上海醫科大學附屬華山醫院泌尿科）
齊世傑（加拿大蒙特利爾大學聖母瑪莉亞醫院實驗外科器官移植中心）
徐大生（加拿大蒙特利爾大學聖母瑪莉亞醫院實驗外科器官移植中心）
陳惠方（加拿大蒙特利爾大學聖母瑪莉亞醫院實驗外科器官移植中心）
參考文獻
﹝1﹞Pirsch jD, Sollinger HW. Mycophenolate mofetil-clinical and experimental experience. therapeutic Drug Mornitoring, 1996, 18:357-361.
﹝2﹞Ochiai T, Gunji Y, Nagate M, et al. Effects of rapamycin in experimental organ allografting. Transplantation, 1993,56:15-19.
﹝3﹞Laskow DA, Deierhoi MH, Hudson SH, et al. The incidence of subsequent acute rejection following the treatment of refractory renal allograft rejection with mycophenolate mofetil (RS-61443). Transplantation, 1994, 57:640-643.
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