一氧化氮在胃癌進展中的作用

　　中國普通外科雜志1999年7月第8卷第4期

鄒益友　馮德雲　伍趕球　鄭暉

　　【摘要】　目的　探討一氧化氮（NO）在胃癌發病過程中的作用。方法　42例經胃鏡活檢、病理檢查證實為胃癌，採用地高辛標記的誘導型一氧化氮合酶（iNOS）mRNA探針經原位雜交顯示細胞內的iNOSmRNA的表達情況，並與癌週組織及淺表胃炎組織比較。結果　在42例胃癌患者，iNOSmRNA信號強陽性（＋＋＋）11例，中度陽性（＋＋）14例，低度陽性（＋）13例，可疑陽性（±）3例，陰性（－）1例；在癌週組織多為（±）或（－）；與淺表性胃炎相比，差異有高度顯著性（P＜0．01）。結論　大多數胃癌患者的癌細胞內iNOSmRNA表達陽性，提示胃癌細胞自身能產生一氧化氮。

　　【主題詞】:胃腫瘤／病因學腺癌／病因學 一氧化氮

　　【中國圖書分類號】：R735.2　R730　R61

　　一氧化氮（NO）是生物體內近年來頗受關注的信息傳遞小分子，並與許多疾病發生發展過程有關。由于NO可引起DNA的損傷，導致基因突變，其氧化代謝產物亞硝酸鹽（NO－2）是一個公認的致癌劑，加之在萎縮性胃炎（易發展為胃癌）觀察到隨著萎縮程度的加重胃液中NO－2顯著增加，因此，在胃癌發生過程中可能包含NO機制^﹝1﹞。目前認為，胃粘膜內NO來源于巨噬細胞和多形核白細胞^﹝2﹞，而胃癌細胞自身能否產生NO尚不清楚。鑑于一氧化氮合酶（NOS）是形成NO的關鍵限速酶，為此，我們觀察了胃癌細胞內誘導型一氧化氮合酶（iNOS）mRNA（信使核糖核酸）的表達情況，現報告如下。

　　1 材料和方法

　　1.1 材料及分組

　　（1）胃癌組　42例，均經胃鏡檢查及病理檢查證實為胃癌。男20例，女22例，平均年齡49.9±13.5歲（26～72歲）。病理組織學類型：低分化腺癌28例（66.7％），印戒細胞癌5例（11.9％），中、高分化腺癌3例（7.1％），高分化腺癌2例（4.8％），低、未分化腺癌1例（2.4％），未分化腺癌1例（2.4％），中、低分化腺癌1例（2.4％），中、中分化腺癌1例（2.4％）。

　　（2）淺表性胃炎組　44例，均經胃鏡檢查及病理檢查證實。男26例，女18例，平均年齡45.4±11.2歲（18～64歲）。與胃癌組比較，性別、年齡均無顯著性差異（P＞0．05）。

　　1.2 試劑

　　地高辛配基標記的iNOSmRNA試劑盒系武漢博士德公司產品，蛋白酶K系德國E．Merck公司產品。

　　1.3 方法

　　1.3.1　iNOSmRNA原位雜交　按如下步驟進行：①石蠟切片常規脫蠟至水，3％H2O2室溫處理10min以滅活內源性過氧化物酶；②切片滴加25mg／L的蛋白酶K，37℃消化15min，以暴露mRNA；磷酸鹽緩衝液（PBS）清洗5min×3次；③雜交前的處理及雜交：將地高辛標記探針放入80～90℃水中變性10min，取出後立即插入碎冰中，保持3min。切片空氣中幹燥後，按每張切片加10μl地高辛記探針液，加蓋雜交專用蓋玻片，于37℃濕盒中雜交16～24h；④雜交後洗滌：揭掉蓋玻片，37℃2倍檸檬酸鈉氯化鈉緩衝液（2×SSC）洗滌5min×2次；37℃的0.1×SSC洗10min×1次，洗滌時間應予嚴格控制；⑤滴加封閉液，室溫孵育20min，不洗；⑥滴加封閉液，室溫孵育20min，不洗；⑦滴加鼠抗地高辛抗體于37℃溫箱孵育30min，0.5MPBS洗5min×3次，勿用其它緩衝液和蒸餾水洗滌；⑧滴加生物素化羊抗小鼠IgG于37℃溫箱孵育20min，0.5MPBS洗2min×3次，勿用其它緩衝液和蒸餾水洗滌；⑨滴加鏈青素標記的過氧化物4次，勿用其它緩衝液和蒸餾水洗滌；