高膽固醇飼料對豚鼠膽囊組織分泌糖蛋白的影響

　　第三軍醫大學學報1999年第21卷第1期

別平　黃志強　韓本立　段恆春　彭志明　李昆　陳莉

　　提　要：目的：應用組織培養方法，了解高膽固醇飼料對豚鼠膽囊上皮細胞合成分泌糖蛋白(GP)的影響。方法：豚鼠40只，分為普通飼料組(A組)與高膽固醇飼料組(B組)，飼養1週。培養膽囊組織，以³H-氨基葡萄糖為底物，測定其合成分泌GP的功能；並加入氫化考的鬆和腹腔巨噬細胞(Mψ)，觀測對膽囊組織合成分泌GP的影響。結果：①B組的腹腔Mψ活力較A組明顯升高。②培養B組膽囊組織，釋放入培養液中的GP含量比A組顯著增加。③在B組膽囊組織培養液中加入氫化考的鬆，膽囊組織釋放GP明顯受抑。④在A組膽囊組織培養液中，加入“普Mψ”，膽囊組織釋放GP的水平與對照水平接近。加入“高Mψ”，濃度較高時膽囊組織分泌GP增強。結論：①高膽固醇飼料可致豚鼠膽囊組織合成分泌GP功能增強。②高膽固醇飼料能增強豚鼠Mψ活力，可促進膽囊組織合成分泌GP。結合動物膽囊結石模型實驗的結果推測，可能與豚鼠Mψ因高膽醇飼料活化，釋放細胞因子TNF、IL-1等有關。

　　關鍵詞：豚鼠膽囊　高膽固醇飼料　巨噬細胞　糖蛋白　豚鼠

　　臨床研究發現膽囊膽固醇結石患者膽囊組織內巨噬細胞(Mψ)數量增加，且膽囊粘膜內主要由Mψ釋放的腫瘤壞死因子(TNF)、白細胞介素-1(IL-1)的含量較無結石者明顯增加^﹝1﹞。膽固醇飼料致動物膽囊結石模型的研究證實，肝髒、膽囊組織內Mψ的數量在結石形成之前即明顯增多，且吞噬活躍，被活化、釋放TNF、IL-1^﹝2﹞。本研究應用組織培養方法，進一步了解高膽固醇飼料及活化的Mψ對膽囊上皮細胞合成分泌糖蛋白(GP)的影響。

　　1　材料與方法

　　1.1　動物

　　雄性豚鼠40只，平均重250 g/只，普通飼料：參照豚鼠飼養標準配制。1.2%膽固醇飼料：將膽固醇幹粉加入普通飼料。按隨機原則將豚鼠分為普通飼料組(n=20)，高膽固醇飼料組(n=20)。均飼養1週。取膽囊前，每組用7只收集腹腔Mψ。

　　1.2　收集豚鼠腹腔Mψ

　　豚鼠飼養1週，麻醉後，注射Hanks液入腹腔，按摩腹壁數分鐘，吸出Hanks液，離心(1　500 r/min，5 min,4℃)，棄上清液，破壞紅細胞和去除白細胞後，再加RPMI1640細胞培養液將Mψ濃度調至1.0×10⁷cell/ml。

　　1.3　膽囊組織培養^﹝3﹞將豚鼠膽囊取下，剪碎，分裝入24孔培養板小孔內，加含有10%小牛血清的199組織培養液包被。培養板倒置放入孵箱內(96%O₂、5%CO₂，37℃)，2 h後翻板，加199培養液800μl、無同位素標記的氨基葡萄糖或³H-氨基葡萄糖(購自上海核物理研究所)等，總量1.0 ml。培養時相分為4、8、16 h。

　　1.4　測定項目及方法

　　1.4.1　腹腔Mψ活力測定^﹝4﹞　　分別取兩組的豚鼠腹腔Mψ懸液(1.0×10⁷Mψ/ml)200μl，加入96孔培養板小孔內，培養48 h。離心，吸上清液180μl棄去，加0.2%噻唑藍50μl，再培養5 h。最後加入二甲基亞